GFP绿色荧光蛋白基因标记的观察方法

GFP是什么？GFP 绿荧光蛋白(Green Fluorescent Portein，GFP)

绿色荧光蛋白是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白，当受到紫外或蓝光激发时，发射绿色荧光。其特点在于：它产生荧光无需底物或辅因子，发色团是其蛋白质一级序列固有的来源于水母的氨基酸残基组成。水母的绿色荧光蛋白很稳定，无种属限制，已在多种动植物细胞中表达成功并产生荧光。GFP 的荧光受外界的影响较小，另外GFP 的检测十分方便，而对细胞的伤害小。

绿色荧光蛋白GFP的发光特性：

GFP吸收的光谱峰值为395nm（紫外），并有一个峰值为470nm的副吸收峰（蓝光）；发射光谱峰值为509nm（绿光），并带有峰值为540nm的侧峰（Shouder）。虽然450～490nm只是GFP的副吸收峰，但由于该激发光对细胞的伤害小，因此通常多使用该波段光源（多为488nm）。此外，GFP的光谱特性与荧光素异硫氰酸盐（FITC）很相似，两者通常共有一套滤光片。GFP荧光极其稳定，在激发光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比荧光素强，特别是在450～490nm蓝光波长下稳定。类似的，GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高，抗光漂白能力强，因此适用于定量测定与分析。由于GFP荧光的产生不需要任何外源反应底物，因此GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白，其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比拟的。但因为GFP不是酶，荧光信号没有酶学放大效果，因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白，比如萤火虫荧光素酶等。

绿色荧光蛋白GFP的常规观察方法有三种：

1.荧光显微镜

 荧光显微镜(Fluorescence microscope) ： 荧光显微镜是以紫外线为光源， 用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。目前在常用的方法就是采用荧光显微镜观察，荧光显微镜在实验室普及，但不足的是必须采集叶片或动物切片进行观察，对培养的标本进行破坏，无法进行活体观察。

2. 紫外光源

采用紫外光源LUYOR-3260UV（又叫紫外线灯、黑光灯 uv lamp，uv light）观察也非常方便，但如果观察植物，植物叶片的叶绿色在紫外线灯下也会发出荧光，对gfp发出的荧光也会产生干扰，另外，标本长时间在紫外光源照射下对GFP标本组织也会造成破坏。

3.便携式GFP激发光源

采用便携式GFP激发光源LUYOR-3415(又叫荧光蛋白观测镜）是便捷、方便的观察方法，因GFP在470nm有一个很高的吸收峰，采用 470nm激发光源能够激发GFP发出明亮的绿色荧光，在观察gfp荧光时，因为激发光为强烈的蓝色光线，佩戴专业的观察眼镜才能观察到清晰的荧光信号。推荐使用美国路阳LUYOR-3260便携式激发光源。因此，使用便携式GFP激发光源为方便有效的观察办法。

荧光蛋白激发光源LUYOR-3415的主要产品应用：

检测转绿色荧光蛋白（GFP）基因、红色荧光蛋白（DsRed）基因植物：水稻、小麦、玉米、大豆、棉花、拟南芥

检测转GFP、DsRed基因动物：小鼠、兔子、猴子等；

检测转GFP、DsRed基因微生物：细菌、真菌、酵母等；

检测GFP、DsRed基因组织特异性表达；